生物指示劑（Biological Indicators, BIs）是評價滅菌過程有效性的核心工具，其生產與性能驗證需嚴格遵循ISO 11138標準，是確保生物指示劑的可靠性、穩定性與可追溯性的關鍵。

本文延續上期對術語和定義的探討，完整闡述從菌懸液制備到抗力測定的全流程要求，為您揭示4大關鍵要點，助您避開生物指示劑滅菌監測失敗的陷阱。

一、核心術語標準化定義——清晰界定是基礎

載體（carrier）：可負載試驗微生物的支持材料。

菌種保藏編號 （culture collection number）：由科學界公-認的菌種保藏機構提供的試驗微生物的唯-一編號。

活菌量（viable count）：實際可回收的菌落形成單位或其他合適單位的數量。

抗力儀（resistometer）：為測量滅菌過程中產生的物理和/或化學參數相關組合而設計的測量設備。

初級包裝（primary package）：包裝系統的一部分，用于維持產品的完整性。

注:保護染菌載體免受損壞和污染，而不阻礙滅菌因子穿透的系統。

次級包裝（secondary package）：為測量滅菌過程中產生的物理和/或化學參數相關組合而設計的測量設備。

二、生產規范要求——嚴控源頭保質量

通過規范菌懸液制備工藝及全程質控、嚴格執行載體與包裝材料標準、強化染菌載體制造全流程管控，實現生物指示劑安全性和穩定性的全面提升。

三、孢子數和抗力測定——關鍵指標定成敗

（一）抗力試驗要求

1、明確目的保性能

抗力試驗的主要目的是證明每批次生物指示劑符合性能要求。

2、判定標準依規范

試驗要證明每批次生物指示劑滿足既定性能要求。在ISO 11138標準其他部分未明確規定抗力性能時，依據ISO 14937中特定關鍵變量定義抗力性能。

3、試驗全面重整合

抗力試驗不僅要測定抗力特性，還需整合活菌計數步驟，全面準確地評估生物指示劑性能。

4、警示清晰明風險

當孢子數和/或抗力低于規定值時，產品標簽上必須有明確警示，提醒使用者注意潛在風險。

（二）試驗微生物與數量

1、微生物明確且精準

必須清晰規定試驗微生物，并準確確定其活菌數。

2、孢子數驗證有范圍

孢子數驗證通過的標準是測定結果在制造商標稱值的50%-300%范圍內，即使低于文件規定的最-低孢子數要求，只要在此比例范圍內仍視為合格。

（三）抗力特性測定

1、多種方法相結合

結合使用存活曲線測定D值、陰性分數法測定D值以及驗證存活-殺滅反應特性三種方法。

2、數值規定要達標

測定結果需符合ISO 11138其他部分的規定，并在生物指示劑標簽上至少標注兩個相關數據。

3、標定D值保穩定

制造商提供的檢測方法測得的標定D值在有效期內應保持在±20%的范圍內。存活曲線雖允許一定誤差，但需維持在可接受的線性范圍內。

4、存活曲線與抗性水平

計數法得到的存活曲線顯示活菌抗性超過5×101。陰性分數法統計分析表明存活試驗中的微生物抗性低于計數法所得水平。兩種方法測得的D值間展現良好相關性，且與預期線性存活曲線無顯著偏差。

5、特定滅菌方式的額外要求

ISO11138其他部分可能針對特定滅菌方式增加要求，如z值。

6、D值驗證有范圍

在規定有效期內，D值的確認測試結果在±20%范圍內即認為初始D值通過驗證，即使低于文件定義的最小D值要求。

7、存活曲線應準確

用存活菌數的log10對時間所作的半對數曲線，其線性相關系數r2應至少達到0.8。

8、試驗條件嚴控制

抗力特性的測定應在指-定的試驗條件下進行，見表2。

四、培養條件與驗證流程——后續保障不可少

通過規范培養箱參數設置，嚴格篩選符合標準的生長培養基及滅菌流程、完善培養周期管控及自動化軟件驗證機制，全面強化生物指示劑培養過程的可控性與結果可靠性。

在實際生產和驗證過程中，務必嚴格按照ISO11138全文及附錄方法執行，確保生物指示劑的質量和性能符合規定，為滅菌過程的有效性提供堅實保障